Система ВЭЖХ
Что такое система ВЭЖХ?
Система высокоэффективной жидкостной хроматографии (система ВЭЖХ) представляет собой лабораторный прибор, в котором применяется принцип высокоэффективной жидкостной хроматографии. Он в основном применяется для анализа органических соединений с высокой температурой кипения, нелетучих, нестабильных при нагревании и большой молекулярной массой.
Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) является важным разделом хроматографии. Он имеет широкий спектр применения и не ограничен летучестью и термической стабильностью аналитов. Почти все соединения, включая высококипящие, полярные, ионные соединения и макромолекулы, можно анализировать и определять с помощью ВЭЖХ, что компенсирует недостатки газовой хроматографии. Около 20% известных органических соединений можно анализировать с помощью газовой хроматографии, а 80% необходимо анализировать с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. ВЭЖХ характеризуется высокой эффективностью разделения, быстрой скоростью анализа, хорошей чувствительностью обнаружения, возможностью анализировать и разделять термически нестабильные физиологически активные вещества с высокими температурами кипения, не испаряющиеся. ВЭЖХ широко используется в науках о жизни, исследованиях окружающей среды, фармацевтических исследованиях, пищевых продуктах и фармацевтических исследованиях.
Принцип ВЭЖХ
Принцип разделения хроматографии заключается в том, что когда компоненты, растворенные в подвижной фазе, проходят через неподвижную фазу, из-за разного размера и силы действия со стационарной фазой, которая может быть адсорбцией, распределением, исключением, сродством и различным удерживанием. время в стационарной фазе, таким образом последовательно вытекая из стационарной фазы.
Высокоэффективная жидкостная хроматография метод, основанный на классической жидкостной хроматографии, в котором жидкость используется в качестве подвижной фазы, а система инфузии под высоким давлением используется для подачи подвижных фаз, таких как отдельные растворители с разной полярностью или смешанные растворители и буферы в разных пропорциях, в колонку, оснащенную высокоэффективная стационарная фаза из очень мелких частиц. При использовании этого метода компоненты в колонке разделяются, а затем обнаруживаются детектором, что позволяет проводить анализ пробы.
Диаграмма ВЭЖХ
Состав системы ВЭЖХ
Команда система ВЭЖХ В целом, система состоит из хроматографического насоса, пробоотборника, колонки, детектора и системы обработки данных. Ключевыми компонентами являются хроматографический насос, колонка и детектор. Кроме того, используется устройство градиентного элюирования, работающее в режиме онлайн. дегазатор, автодозаторпредколонна или защитная колонка, колонка регулятор температурыи так далее, могут быть сконфигурированы в соответствии с потребностями современных ВЭЖХ-приборов и микрокомпьютерных систем управления для автоматизированного управления приборами и обработки данных. Подготовительный инструменты для ВЭЖХ также оснащены автоматическими устройствами сбора фракций.
А. Хроматографический насос
Хроматографический насос является одним из важнейших компонентов система ВЭЖХ. Насосы для хроматографии делятся на насосы постоянного давления и насосы постоянного расхода в зависимости от коэффициента постоянной производительности жидкости. Производительность насосов напрямую влияет на качество всей системы и надежность результатов анализа. Насосы для хроматографии делятся на пневматические насосы и механические насосы в зависимости от режима работы. Среди механических насосов их можно разделить на винтовые шприцевые насосы, однопоршневые поршневые насосы, двухпоршневые поршневые насосы и поршневые мембранные насосы.
а. Сравнительная оценка производительности различных насосов высокого давления.
| Имя | Постоянное напряжение/постоянный ток | Импульс | Замена подвижной фазы | Градиентное элюирование | рециркуляция | Стоимость |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Пневматический усилительный насос | Постоянное напряжение | Нет | неудобство | Требуется два насоса | Нет | Высокий |
| Шприцевой насос с винтовым приводом | Постоянный ток | Нет | неудобство | Требуется два насоса | Нет | Средний |
| Однопоршневой поршневой насос | Постоянный ток | Да | Удобство | Да | Да | Низкий |
| Двухпоршневой поршневой насос | Постоянный ток | Удобство | Да | Да | Высокий | |
| Поршневой мембранный насос | Постоянный ток | Да | Удобство | Да | Да | Средний |
Б. Устройство для дегазации
Пузырьки в растворе подвижной фазы возникают из-за присутствия растворенного кислорода или смешанного воздуха. Как только пузырьки воздуха попадают в детектор, они проявляются на хроматограмме в виде резких шумовых пиков. Маленькие пузырьки медленно накапливаются и становятся большими, которые попадают в канал потока или в колонку и замедляют скорость потока подвижной фазы или вызывают нестабильность скорости потока, что приводит к колебаниям базовой линии. Что еще хуже, когда пузырьки воздуха попадают в колонку, их удаление занимает много времени. При обнаружении флуоресценции растворенный кислород также может гасить флуоресценцию. Растворенные газы также могут вызывать окисление некоторых образцов или изменять рН раствора. В настоящее время для дегазации подвижной фазы жидкостной хроматографии обычно используются автономная дегазация ультразвуковыми колебаниями, онлайновая дегазация продувкой пузырьками инертного газа и онлайновая вакуумная дегазация.
C. Устройство для градиентного элюирования
ВЭЖХ доступна как в изократическом, так и в градиентном элюировании. Изократическая элюция предназначена для поддержания постоянного состава подвижной фазы в течение одного и того же цикла анализа и подходит для образцов с небольшим количеством компонентов и небольшой разницей в свойствах. Градиентное элюирование предназначено для контроля состава подвижной фазы, такого как полярность, ионная сила и рН растворителя, в рамках одного цикла анализа и применяется для сложных проб с большим количеством компонентов и различными свойствами. Преимущества использования градиентного элюирования заключаются в более коротком времени анализа, лучшем разделении, улучшенной форме пика и более высокой чувствительности обнаружения, а недостатком является то, что оно часто вызывает дрейф базовой линии и снижает воспроизводимость. Градиентное элюирование, состоящее из двух растворителей, может быть смешано в любой степени, что приводит к различным профилям элюирования, а именно линейному градиенту, вогнутому градиенту, выпуклому градиенту и ступенчатому градиенту.
D．Семплер
Системы ВЭЖХ обычно оснащаются шестиходовым впрыскивающим клапаном. Метод впрыска шестиходового клапана имеет два типа: метод частичной загрузки жидкостью и метод полной загрузки жидкости.
а. Метод частичной загрузки путем инъекции
Объем инъекции должен составлять не более 50% (до 75%) объема кольца для количественного определения и требует, чтобы каждый объем инъекции был точным и идентичным. Точность и воспроизводимость этого метода инъекции определяются мастерством взятия проб из шприца и легкостью получения пикового расплывания, вызванного инъекцией.
б. Метод инъекции с полной загрузкой жидкости
Объем впрыска должен быть не менее чем в 5-10 раз больше объема кольца для количественного определения (не менее чем в 3 раза), чтобы полностью заменить подвижную фазу в кольце, устранить эффект стенки и обеспечить точность и повторяемость впрыска. .
Е. Система разделения
Система разделения включает в себя колонну, защитную колонну и температурную камеру колонны.
Хроматография — это метод разделения и анализа. Разделение является основой этого метода, поэтому колонка, отвечающая за разделение, — это сердце хроматографической системы. Хроматографическая колонка состоит из трубки колонки, крышки, уплотнительного кольца (феррулы), ситовой пластины (фильтр пластина), соединение, винт и т. д. Хроматографический наполнитель представляет собой частицы материала, обычно сферические частицы размером 5-10, которые используются для заполнения колонки после процесса приготовления. Хроматографические колонки можно разделить на аналитические и препаративные в зависимости от их назначения, и требования к размерам также различаются.
Функция защитной колонки заключается в предотвращении загрязнения колонки сильно адсорбированными примесями, что продлевает срок службы колонки. Для разных типов колонн следует выбирать защитные колонны с соответствующей набивкой. Обратите внимание на срок годности сердечника колонки, который следует регулярно заменять.
Назначение температурной камеры колонки состоит в том, чтобы поддерживать постоянную температуру колонки, чтобы избежать изменения времени удерживания и обеспечить стабильность разделения.
F. Детектор
Детектор представляет собой устройство, используемое для непрерывного наблюдения за изменением состава и содержания стоков после разделения на колонке, и является одним из трех ключевых компонентов детектора. прибор ВЭЖХ. Детектор ВЭЖХ требует высокой чувствительности, низкого уровня шума, широкого линейного диапазона, хорошей воспроизводимости и широкого спектра применений.
G. Система обработки данных
Операции по сбору, хранению, отображению, печати и обработке тестовых данных, чтобы разделение, подготовка или идентификация проб могли быть выполнены правильно, являются функциями системы обработки данных.
2. ВЭЖХ против ФПЖХ
Что такое FPLC-хроматография?
FPLC также известен как быстрая белковая жидкостная хроматография. Принцип FPLC подобен принципу высокоэффективной жидкостной хроматографии. Это современная жидкостная хроматография, разработанная путем введения теории газовой хроматографии из классической жидкостной колоночной хроматографии и реформирования фазового тела с помощью инфузионного насоса высокого давления, высокочувствительного детектора, устройства градиентной элюции, автоматического устройства сбора и микрокомпьютера.
система FPLC специально разработан для разделения белков, пептидов и полинуклеотидов, что является важной инновацией FPLC последних лет. Он не только сохраняет характеристики ВЭЖХ, такие как быстрое и высокое разрешение, но также обладает характеристиками большой емкости колонки, высокой эффективностью извлечения и меньшей дезактивацией биологических макромолекул. Поэтому в последние годы он широко используется для разделения белков, пептидов и олигонуклеотидов.
Сходства и различия между системами ВЭЖХ и системами FPLC
| сходства | Различия | Заполнитель | |
|---|---|---|---|
| ВЭЖХ | Оба оснащены инфузионными насосами, высокочувствительными детекторами, устройствами для градиентного элюирования, автоматическими устройствами для сбора и компьютерным управлением, и оба характеризуются скоростью, высоким разрешением и высокой эффективностью разделения. | а. Трубопроводная система ВЭЖХ в основном изготовлена из металла. б. Подвижная фаза приводится в движение поршневыми насосами или диафрагменными насосами. в. Он характеризуется высоким давлением, малым внутренним диаметром колонки и высокой аналитической точностью. д. Максимальная скорость потока обычно не превышает 20 мл/мин (некоторые препараты для ВЭЖХ могут достигать 300 мл/мин). е. Иногда требуется использование органического растворителя определенной концентрации, и он подходит для обнаружения микропроб или подготовки небольших объемов очистки. | ВЭЖХ может анализировать низкокипящие молекулы с низкой относительной молекулярной массой, высококипящие среднемолекулярные молекулы, высокомолекулярные органические соединения (включая полярные и неполярные), ионные неорганические соединения и термически нестабильные биомолекулы. |
| FPLC | а. Система трубопроводов FPLC состоит из пластиковых труб, устойчивых к высокому давлению. б. Подвижная фаза в основном приводится в действие плунжерным насосом. в. Он имеет характеристики среднего и низкого давления и большого внутреннего диаметра колонны. д. Диапазон скорости потока 0-100 мл/мин (максимальная скорость потока до 1,000 мл/мин). е. Аналитическая точность не так высока, как у ВЭЖХ, и используются только обычные растворы неорганических солей. ф. Он подходит для крупномасштабной очистки образцов. | FPLC специально разработан для разделения и очистки белков, пептидов и полинуклеотидов. |
Как приобрести систему ВЭЖХ?
Если вы заинтересованы в нашем Система ВЭЖХ или есть какие-либо вопросы, пожалуйста, напишите по электронной почте info@antiteck.com, мы ответим вам как можно скорее.