Спиновая колонка
Каталог: Спиновые колонки
Что такое спин-колонка?
Спин-колонки можно использовать для выделения ДНК/РНК и очистки различных материалов. прядильная колонка содержит анионообменную и катионообменную смолу. В реакции ионного обмена катионы (такие как Na+) в воде переносятся на смолу, в то время как способный к обмену H+ на ионообменной смоле переносится в воду. Процесс переноса Na+ из воды в смолу представляет собой процесс замещения ионов. А процесс обмена Н+ на смоле на воду называется процессом высвобождения. Таким образом, в результате процесса замещения и освобождения Na+ и H+ меняются местами, и это изменение называется ионным обменом. Точно так же отрицательная смола вытесняет OH- с образованием H2O. Смоляной обмен характеризуется высокой обменной емкостью, низким сопротивлением потоку воды, высокой механической прочностью и хорошей химической стабильностью. В то же время обмен смолы имеет обратимую реакцию обмена, которая облегчает регенерацию и выбор различных адсорбций ионов для достижения цели удаления и очистки солей.
Спин-колонка имеет характеристики простой работы, высокой скорости восстановления и стабильной работы. В настоящий момент, прясть столбцы пользуются популярностью в большинстве лабораторий и компаний в стране и за рубежом. Они используют мембраны из диоксида кремния в качестве специфических адсорбирующих материалов для нуклеиновых кислот, оставаясь в значительной степени неабсорбирующими для других биологических материалов. Это гарантирует максимальное извлечение ДНК\РНК из образца при удалении других примесей.
Линия сборки спин-колонок
Компоненты продукта
а. Трубка для сбора жидкости
Пробирки для сбора изготавливаются из медицинского полипропилена объемом 2 мл и 50 мл.
б. Столбец
Колонка изготовлена из медицинского полипропилена с сетчатым дном или с коннектором и имеет объем примерно 1 мл или 25 мл.
c. Прокладка
Прокладка представляет собой специальный волокнистый материал, устойчивый к кислотам и щелочам, большинству органических растворителей и не адсорбирующийся на большинстве биомолекул.
d. Фильтрующая мембрана
Специально оптимизированные силиконовые или стекловолоконные мембраны из импортного сырья способны максимально адсорбировать молекулы нуклеиновых кислот.
Особенности спин-колонки
A. Спин-колонки для очистки ДНК.
B. Спин-колонки для очистки РНК.
C. Связывающая способность 45-50 мкг.
D. Размер фрагмента составляет от 65 до 10 кб.
Буферные растворы подходят для выделения плазмид в небольших количествах, экстракции из геля и очистки ПЦР-реакций.
F. прядильная колонка наполнен большим количеством мембран из стекловолокна, что представляет собой метод, основанный на методе экстракции из стекловолокна для быстрого извлечения нуклеиновых кислот.
Применение спин-колонки
Спин-колонка и пробирка для сбора имеют много применений в лаборатории, например:
a. РНК очищение
б. Выделение плазмидной ДНК.
c. Выделение геномной ДНК.
d. Быстрая очистка продуктов ПЦР-амплификации,
e. Выделение нитей ДНК из агарозных гелей.
f. Выделение специфической ДНК из реакционных смесей,
g. Очистка продуктов ПЦР,
h. Очистка одноцепочечной или двухцепочечной ДНК или РНК от примесей, таких как соли, растворители, ферменты или белки.
i. Другие.
Спин-колонки для очистки ДНК
А. Экспериментальные принципы очистки плазмидной ДНК.
Бромид этидия связывается с ДНК, внедряясь между основаниями, что, в свою очередь, вызывает раскручивание двойной спирали, увеличивая длину линейной ДНК. Для компенсации в замкнутую петлю плазмидной ДНК вводятся суперспиральные единицы. Количество суперспиральных единиц значительно увеличивается, предотвращая дальнейшее внедрение молекулы бромида этидия. Однако линейная молекула не ограничена и может продолжать связывать больше бромида этидия до достижения насыщения (приблизительно 1 молекула бромида этидия на 2 пары оснований). Плавучая плотность линейных и замкнутых молекул ДНК в растворах хлорида цезия, содержащих насыщающие количества бромида этидия, различается из-за различий в количестве связанного красителя. В течение многих лет центрифугирование в градиенте хлорида цезия-бромида этидия было предпочтительным методом для получения больших количеств плазмидной ДНК. Однако этот процесс дорогостоящий и трудоемкий, и для этой цели было разработано множество альтернативных методов. К таким методам относятся, например, разделение плазмидной ДНК и ДНК хозяина с помощью ионообменной хроматографии. гель-фильтрационная хроматография, поэтапное осаждение и т. д. Среди них наиболее часто используется метод поэтапного осаждения с применением полиэтиленгликоля.
Б. Колонка для очистки ПЦР
а. Прямая очистка продукта
После завершения ПЦР-амплификации продукт необходимо обнаружить с помощью электрофореза в агарозном геле. В случае наличия одной полосы без других посторонних полос продукт можно очистить непосредственно. Распространенными методами очистки являются электрофорез в силикагеле. хроматографическая колонка метод, метод с использованием магнитных шариков и другие методы очистки.
б. Силикагелевая колонка для экстракция ДНК
Принцип спин-колонны с кварцевой мембраной
Что адсорбирует ДНК в большинстве центробежных колонок в прядильная колонка центробежный представляет собой кварцевую мембрану, представляющую собой слой стеклянных волокон. Его поверхность имеет большое количество модифицированных гидроксильных групп кремния (Si-OH). Гидроксильная группа кремнезема после диссоциации в растворе заряжена отрицательно, а затем образует электрический мостик с положительно заряженными ионами соли и отрицательно заряженной ДНК, которая адсорбирует ДНК, превращая двухцепочечную ДНК в одноцепочечную и не элюируемую биомолекулярными растворителями. Однако его можно гидратировать водорастворимым буфером, а затем количественно выделить, достигая таким образом очистки и разделения.
После завершения ПЦР-амплификации, кроме фрагментов ДНК, в реакционной системе также присутствуют ионы, dNTP, праймеры и полимераза, которые повлияют на последующие эксперименты по клонированию и секвенированию, поэтому очистка продуктов является обязательным этапом.
Очистка белка на спин-колонке
Выделение и очистка белков широко используются в биохимических исследованиях. Типичная эукариотическая клетка может содержать тысячи различных белков, некоторые из которых очень многочисленны, а некоторые содержат всего несколько копий. Чтобы изучить конкретный белок, этот белок должен быть сначала очищен от других белков и небелковых молекул. Цель очистка белка заключается в отделении целевого белка от всех компонентов клеточного лизата при сохранении биологической активности и химической целостности белка. Разделение и очистка белков является сложной и ответственной задачей, и вам необходимо выбрать соответствующий метод очистки для повышения чистоты полученных белковых продуктов в соответствии с характеристиками белка.
Различные аминокислотные последовательности и пространственные структуры различных белков приводят к различиям в их физических, химических и биологических свойствах. Используя различия в свойствах между выделяемым белком и другими белками, можно разработать приемлемую схему очистки белка.
Общую процедуру выделения и очистки конкретного белка можно разделить на три этапа: предварительная обработка, грубая сортировка и подразделение.
Предварительная обработка
Для выделения и очистки белка его необходимо сначала извлечь из исходной ткани или клетки в растворимом состоянии, сохранив при этом его первоначальное природное состояние без потери биологической активности. По этой причине животные материалы следует предварительно очистить от соединительной и жировой ткани, семена следует очистить от шелухи или даже удалить из семенной оболочки, чтобы избежать загрязнения дубильными веществами и другими примесями, а масличные семена желательно предварительно обезжирить органическим растворителем с низкой температурой кипения, таким как эфир. Затем ткани и клетки измельчают в соответствии с выбранным для каждого случая методом. Животные ткани и клетки можно измельчать с помощью электрических толкушек или гомогенизаторы или измельчены с помощью ультразвуковой обработки. Растительные ткани и клетки, поскольку их клеточные стенки состоят из целлюлозы, гемицеллюлозы и пектина, обычно требуют измельчения с помощью кварцевого песка или стеклянного порошка, а также могут использоваться соответствующие экстракты или обработка целлюлазой. Фрагментация бактериальных клеток более проблематична, поскольку весь скелет бактериальной клеточной стенки представляет собой пептидогликановый мешковидный макромолекул, соединенный ковалентными связями, который очень прочен. Распространенные методы разрушения бактериальных клеточных стенок включают ультразвуковое измельчение, измельчение с песком, экструзию под высоким давлением или обработку лизоцимом. После фрагментации тканей и клеток желаемый белок извлекается путем выбора соответствующего буфера. Нерастворимые материалы, такие как клеточные обломки, удаляются центрифугированием или фильтрацией.
Если желаемый белок сконцентрирован в одной клеточной фракции, такой как ядро, хромосома, рибосома или растворимая цитоплазма, их можно разделить дифференциальным центрифугированием, и клеточную фракцию собирают в качестве материала для следующего этапа очистки. Если желаемый белок связан с клеточной мембраной или мембранными органеллами, структура мембраны должна быть деполимеризована с использованием ультразвука или деконтаминантов, а затем экстрагирована соответствующей средой.
Грубая сепарация
После получения белковых экстрактов (иногда смешанных с нуклеиновыми кислотами, полисахаридами и т. д.) следует выбрать набор соответствующих методов для отделения желаемого белка от других разных белков. Как правило, эта стадия разделения осуществляется путем засоления, осаждения в изоэлектрической точке и постепенного разделения с помощью органических растворителей. Эти методы отличаются простотой и большим объемом обработки, что позволяет удалить большое количество примесей, а также сконцентрировать белковый раствор. Некоторые белковые экстракты имеют большой размер и не подходят для концентрирования путем осаждения или соления. Их можно концентрировать не только путем фильтрации, гель-фильтрации, лиофильной вакуумной сушки или другими методами.
Тонкое разделение
После того, как образец разделен грубой классификацией, его объем, как правило, невелик, и большая часть гетеропротеинов удалена. Для дальнейшей очистки обычно используют хроматографические методы, включая гель-фильтрацию, ионообменную хроматографию, адсорбционную хроматографию и аффинную хроматографию. Электрофорез, включая электрофорез зонной полосы и фокусирование изоэлектрического пятна, также может быть выбран в качестве конечной стадии очистки, если это необходимо. Методы, используемые для тонкого разделения, обычно имеют небольшой масштаб, но высокое разрешение.
Кристаллизация является заключительным этапом разделения и очистки белков. Хотя процесс кристаллизации не гарантирует обязательной гомогенности белка, кристаллизация может происходить только в том случае, если в растворе количественно преобладает белок. Сам процесс кристаллизации сопровождается определенной очисткой, а перекристаллизация удаляет небольшое количество захваченных белков. Поскольку во время кристаллизации никогда не обнаруживаются денатурированные белки, кристаллизация белков является не только признаком чистоты, но и убедительным показателем того, что продукт находится в своем естественном состоянии.
Белковая концентраторная спин-колонка
Метод белковые спин-колонки относится к хроматографическому методу, в котором буфер или органический растворитель используется в качестве подвижной фазы, а твердый адсорбент используется в качестве неподвижной фазы для приготовления состава колонки.
Машина для сборки спин-колонн со вставкой фильтр
Как купить спин-колонку?
Если вы заинтересованы в нашем Спиновая колонка или есть какие-либо вопросы, пожалуйста, напишите по электронной почте info@antiteck.com, мы ответим вам как можно скорее.