Среда для замораживания клеток
Что такое среда для замораживания клеток?
Криоконсервация клеток является распространенным методом технологии клеточных культур для сохранения и длительного хранения клеток. Среда для замораживания клеток, раствор, который необходимо использовать для клетки лиофилизацияИспользуется для сохранения клеток и играет ключевую роль в закупке, отправке, обмене и доставке клеток. Поэтому особенно важно выбрать хороший центр хранения клеток. среда для замораживания клеточных культур.
Среда для замораживания клеточных культур
Исследователям часто приходится заморозить клетки и сохранить их для последующих экспериментов или клинического использования. Основной процесс довольно прост: медленно заморозьте клетки, поместите пробирки для криоконсервации в жидкий азот и быстро разморозьте их, когда это необходимо. Среда для замораживания клеток поддерживает клетки и предотвращает образование кристаллов льда. Однако результаты использования различных замораживающая среда может быть очень разным.
Обычные среды для замораживания клеток добавляют в культуральную среду защитный агент, который обычно представляет собой 10% диметилсульфоксида (ДМСО) и 10%-90% бычьей сыворотки. Проблемы, возникающие при замораживании клеток в обычных раствор для лиофилизации клеток резюмируются следующим образом.
а. Процедурное охлаждение (4°C → -20°C → -80°C → жидкий азот). Этот этап трудоемкий и занимает много времени.
б. Содержит сыворотку с повышенным риском клеточного заражения (вирусы, микобактерии, микоплазмы и т. д.).
c. Различия в партиях и качестве сыворотки приводят к различиям в партиях среды для заморозки клеток.
d. Для высоких температур замораживания требуется замораживание жидким азотом.
e. Микрообъемные образцы и образцы, полученные непосредственно в лунках планшетов (например, планшеты для культивирования), не подлежат лиофилизации.
Следующие три продукта лиофилизации клеток без сыворотки не содержат сыворотки и не запрограммированы на охлаждение и могут быть помещены непосредственно в холодильник с температурой -80°C для длительного замораживания и хранения.
А. Раствор для лиофилизации клеток без сыворотки
характеристика продукта
а. Не содержит сывороточных и животных белков для снижения риска заражения вирусами, микобактериями и микоплазмами.
b. Специальная формула позволяет эффективно повысить выживаемость клеток после заморозки и скорость их восстановления.
c. Готов к использованию, не требует подготовки на месте.
d. Универсальный тип, подходящий для замораживания и хранения различных линий клеток животных и человека, а также первичных клеток.
e. Четкий состав, отсутствие различий от партии к партии.
f. Не требует программного охлаждения и жидкого азота. Может быть помещен непосредственно в морозильную камеру при температуре -80℃ для длительного хранения и заморозки.
Например, возможна микро- и внутриклеточная заморозка (заморозка гибридомных клеток), что позволяет экономить время и повышать эффективность.
Эффект заморозки
| Клеточная линия | Время заморозки / (Месяц) | Выживаемость клеток (%) / (температура замерзания -80 ℃) |
|---|---|---|
| 293T | 12 | 95.58 |
| 4T1 | 12 | 96.25 |
| ХУВЕК | 12 | 88.14 |
| Хела | 12 | 93.18 |
B. Бессывороточная среда для криоконсервации клеток с низким содержанием ДМСО.
характеристика продукта
а. Высокая безопасность, отсутствие сыворотки и ингредиентов животного происхождения, низкая вероятность заражения вирусами, микобактериями и микоплазмами. Более высокая стабильность качества продукции от партии к партии.
б. Низкое содержание ДМСО (5% ДМСО, об/об) значительно снижает потенциальное токсическое воздействие на клетки.
c. Высокая жизнеспособность клеток без различий между партиями.
d. Полностью лиофилизированная жидкая лекарственная форма, готовая к непосредственному применению, удобная и простая в использовании. Может храниться непосредственно в холодильнике при температуре -80℃ для заморозки и хранения без трудоемкого процесса запрограммированного охлаждения (экономия времени, усилий и денег).
е. Его можно замораживать непосредственно на месте, например, субклоны гибридомных клеток, что может значительно сократить трудозатраты и избежать загрязнения.
Эффект заморозки
| Клеточная линия | Время заморозки / (Месяц) | Сравнение А Выживаемость клеток (%) | Сравнение Б Выживаемость клеток (%) | Выживаемость клеток (%) |
|---|---|---|---|---|
| 3T3 | 1 | 86 | 89 | 97 |
| 293E | 1 | 85 | 86 | 93 |
| 293F | 1 | 85 | 85 | 92 |
C. Среда для криоконсервации клеток без сыворотки и ДМСО.
характеристика продукта
а. Высокая безопасность, отсутствие сыворотки и ингредиентов животного происхождения, низкая вероятность заражения вирусами, микобактериями и микоплазмами. Более высокая стабильность качества продукции от партии к партии.
б. Не содержит ДМСО, не оказывает потенциального токсического воздействия на клетки.
c. Высокая жизнеспособность клеток без различий между партиями.
d. Полный состав раствора для лиофилизации, может использоваться непосредственно, удобен и прост в применении.
e. Его можно хранить непосредственно в холодильнике при температуре -80℃ для заморозки, минуя трудоемкую процедуру охлаждения (экономия времени, усилий и денег). Нет необходимости использовать ☆ программируемый охлаждающий прибор и помещать продукт в жидкий азот при температуре -196℃.
f. Его можно замораживать непосредственно на месте, например, субклоны гибридомных клеток, что может значительно сократить трудозатраты и избежать загрязнения.
Сравнение универсальных сред для замораживания клеток с тремя вышеупомянутыми бессывороточными средами для замораживания клеток
| Универсальная среда для замораживания клеток | Бессывороточный раствор для лиофилизации клеток | Среда для криоконсервации клеток с низким содержанием ДМСО, не содержащая сыворотки | Среда для криоконсервации клеток без сыворотки без ДМСО | |
|---|---|---|---|---|
| Основные компоненты | Содержит сыворотку, ДМСО | Без сыворотки, с ДМСО 10% | Без сыворотки, с ДМСО 5% | Без сыворотки и без ДМСО |
| цитотоксичность | Высокий | Высокий | Низкий | - |
| Безопасность. | Низкий Высокий риск заражения вирусами, микобактериями и микоплазмами животного происхождения | Высокий Отсутствие риска заражения вирусами, плесенью и микоплазмами животного происхождения | Высокий Отсутствие риска заражения вирусами, плесенью и микоплазмами животного происхождения | Высокий Отсутствие риска заражения вирусами, плесенью и микоплазмами животного происхождения |
| Криоконсервированные типы клеток | Подходит для замораживания клеток, содержащих сыворотку | Общее назначение Подходит для всех видов криоконсервации клеток | Общее назначение Подходит для всех видов криоконсервации клеток | Общее назначение Подходит для всех видов криоконсервации клеток |
| Состояние роста клеток культуры без сыворотки | Легко изменить, легко вернуть из подвешенного состояния в состояние стены | Поддерживать статус суспензионной культуры | Поддерживать статус суспензионной культуры | Поддерживать статус суспензионной культуры |
| Различия между партиями | Большие различия в партиях | Нет различий между партиями | Нет различий между партиями | Нет различий между партиями |
| Метод деятельности | Громоздкие шаги, требующие запрограммированного охлаждения и замораживания | Легко и быстро Холодильник с одноступенчатой заморозкой до -80 ℃ | Легко и быстро Холодильник с одноступенчатой заморозкой до -80 ℃ | Легко и быстро Холодильник с одноступенчатой заморозкой до -80 ℃ |
| Оборудование для консервации | Высокая потребность (жидкий азот) | Низкие требования (холодильник -80 ℃) | Низкие требования (холодильник -80 ℃) | Низкие требования (холодильник -80 ℃) |
| Микрозаморозка | Легкая гибель клеток и низкая выживаемость | Высокая выживаемость клеток | Высокая выживаемость клеток | Высокая выживаемость клеток |
| Замораживание на месте | Не выполнимо | Выполнимый и простой в использовании | Выполнимый и простой в использовании | Выполнимый и простой в использовании |
Использование сред для замораживания клеток
Среда для замораживания восстановительной клеточной культуры
Основным принципом замораживания и восстановления клеток является медленное замораживание и быстрое оттаивание. Эксперименты показали, что это может максимально сохранить жизнеспособность клеток.
В настоящее время замораживание клеток использует глицерин или диметилсульфоксид в качестве защитного агента. Эти два вещества могут улучшить проницаемость клеточной мембраны для воды, плюс медленное замораживание может заставить воду внутри клетки просачиваться из клетки, уменьшая образование внутриклеточных кристаллов льда и, таким образом, уменьшая повреждение клеток, вызванное образованием льда. кристаллы. Реанимацию клеток следует проводить путем быстрого оттаивания, что может обеспечить расплавление внеклеточных кристаллов за очень короткое время и избежать повреждения клеток из-за медленного оттаивания, позволяющего воде просачиваться в клетки для образования внутриклеточной рекристаллизации.
Криоконсервация клеток является важным техническим инструментом для культивирования клеток, внесения семян, сохранения семян и беспрепятственных экспериментов. Важно быстро заморозить первичные клетки в клеточной культуре и установлении линии. В процессе получения гибридомных моноклональных антител замораживание и сохранение семян гибридомных клеток, субклональных клеток, полученных при каждом клонировании, часто является важной экспериментальной операцией. Без создания стабильной клеточной линии или стабильной клеточной линии, секретирующей антитела, процесс культивирования клеток может быть неудачным в любое время из-за загрязнения клеток, потери способности секретировать антитела или генетической мутации и т. д. Без замораживания исходного ячейки, эксперимент будет потерян из-за вышеупомянутых аварий.
А. Что такое заморозка клеток?
Когда клетки хорошо растут и предложение превышает спрос, клетки можно считать замороженными и хранить для последующего использования. Когда температура ниже -70 ℃, ферментативная активность внутри клетки прекращается, и метаболическая активность прекращается, поэтому цель длительного хранения может быть достигнута. При замораживании клеток по мере снижения температуры вода внутри и снаружи клеток будет кристаллизоваться, а образовавшиеся кристаллы льда вызовут разрушение клеточных мембран и органелл, вызывая тем самым гибель клеток, особенно на стадии -20-0℃, кристаллы льда имеют игольчатую форму и легко вызывают повреждение клеток.
Б. Как уменьшить повреждение, вызванное внутриклеточными кристаллами льда?
Используйте среда для замораживания клеток, Общее среда для замораживания клеточных культур представляет собой глицерин или диметилсульфоксид (ДМСО), способный быстро проникать через клеточную мембрану, попадать в клетку, снижать температуру замерзания, задерживать процесс лиофилизации, повышать проницаемость клеточной мембраны, повышать концентрацию внутриклеточных ионов, снижать образование внутриклеточных кристаллов льда и, таким образом, достичь цели защиты клеток.
C. Подготовка клеток к криоконсервации
Приготовление раствора для лиофилизации (обычно 10% ДМСО + 90% ФТС с питательной средой). Или же среда для замораживания клеток: сыворотка: ДМСО=7:2:1.
D. Операция криоконсервации
Отбирают клетки с хорошей жизнеспособностью и плотностью около 80%, когда клетки находятся в логарифмической фазе роста и наиболее подходят для лиофилизации. Лиофилизация клеток по-прежнему подразделяется на лиофилизацию клеток стенки и лиофилизацию клеток суспензии.
Наблюдайте за состоянием клеток под микроскопом. Если плотность клеток была высокой и среда пожелтела, необходимо было заменить жидкость за 4 часа до операции лиофилизации. После полного роста клеток среду в чашке Петри аккуратно удаляли с помощью аспиратора, затем один или два раза промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) и, пытаясь удалить промытый PBS, добавляли трипсин для переваривания клеток. При переваривании необходимо контролировать время действия трипсина, поскольку переваривание клеток происходит по-разному из-за того, что каждая клетка прикрепляется к стенкам чашки Петри, и время переваривания может значительно варьироваться. Переваривание трипсином — это деликатная операция, которая не только обеспечивает полное переваривание клеток и их превращение в суспензию отдельных клеток для равномерного посева, но и предотвращает серьезное повреждение клеток, вызванное чрезмерным перевариванием. Активность трипсина, этапы переваривания и используемые реагенты у каждого клиента разные, поэтому время переваривания нельзя точно определить, и здесь преобладает опыт клиента. Для этапа ферментативного расщепления, если у клиента мало опыта работы с клетками и он не может точно контролировать время действия трипсина, мы рекомендуем выполнить следующие действия: сначала поместите клетки после того, как трипсин нагреется до комнатной температуры, в емкость с 37℃. инкубаторЗатем продувайте клетку каждые 30 секунд. Если клетку можно раздвинуть (она не переваривается, пока полностью не всплывет на поверхность), это означает, что переваривание клетки завершено и его можно прекратить. После переваривания клетки аккуратно перемешайте их, чтобы не образовалось слишком много пузырьков. Если 30 секунд продувки не помогают, подождите 30 секунд и повторите операцию.
После переваривания добавить 6-8 мл полной среды для прекращения переваривания, перемешать клетки, собрать клеточную суспензию центрифугированием при 900-1000 об/мин в течение 3 мин, отбросить надосадочную жидкость, добавить приготовленную лиофилизационную среду, осторожно продуть пипеткой для придания клеткам однородности клетки делят на лиофилизационные пробирки по 1-1.5 мл на пробирку, маркируют лиофилизационные пробирки названием клеток, временем лиофилизации и оператором и помещают лиофилизационные пробирки с клетками в толстостенные пенопластовые коробки. Клетки помещали в толстостенный пенопластовый бокс в холодильник при 4°С на 10-30 мин, а затем помещали в холодильник при -80°С на ночь вместе с пенопластовым боксом.
Как приобрести среду для заморозки клеток?
Если вы заинтересованы в нашем Среда для замораживания клеток или есть какие-либо вопросы, пожалуйста, напишите по электронной почте info@antiteck.com, мы ответим вам как можно скорее.