Блюдо для культивирования клеток
Что такое чашка для культивирования клеток?
Чашка для культивирования клеток Лабораторный сосуд, используемый для микробной или клеточной культуры, состоящий из плоского дискообразного дна и крышки, как правило, из стекла или пластика. Материалы чашек Петри делятся на две категории, в основном пластиковые и стеклянные, стекло можно использовать для растительного материала, также можно использовать микробную культуру и культуру клеточных стенок животных. Пластмассовые могут быть из полиэтилена, а есть одноразовые и многоразовые, пригодные для лабораторных работ по инокуляции, делинетации и сепарации бактерий, а также могут быть использованы для культивирования растительного сырья.
Первоначально он был разработан в 1887 году Юлиусом Рихардом Петри (1852-1921), бактериологом, работавшим под руководством немецкого биолога Роберта Коха, и поэтому также известен как «чашка Петри». чашки Петри являются хрупкими и хрупкими, поэтому их следует чистить и размещать с осторожностью и осторожностью. Лучше всего мыть посуду после использования и хранить ее в безопасном и фиксированном месте, чтобы предотвратить повреждение и поломку.
Чашка для культивирования клеток подходит для станций профилактики эпидемий, больниц, биологических продуктов, пищевой промышленности, фармацевтической промышленности и других подразделений для выделения и культивирования бактерий, проверки антимикробной активности и качественного анализа. В сельском хозяйстве водные и другие научные исследования используются для искусственного выращивания семян, волос, зубов, растений, насекомых, видов рыб и исследований вылупления. Электронная промышленность или другие отрасли промышленности, используемые в качестве судов.
Спецификация чашки для культивирования клеток
| Спецификация (мм) | Высота (мм) | Площадь выращивания (см2) | Рекомендуемое количество жидкости (мл) |
|---|---|---|---|
| 35 | 10 | 8 | 3 |
| 60 | 15 | 21 | 5 |
| 100 | 20 | 55 | 10 |
| 150 | 25 | 148 | 30 |
| 245 | 25 | 500 | 100 |
Тип чашки для культивирования клеток
а. В зависимости от различных способов использования чашки Петри можно разделить на чашки для клеточных культур и чашки для бактериальных культур.
б. В зависимости от используемых материалов чашки Петри для культивирования клеток делятся на следующие категории. пластиковые чашки для культур и стеклянная культуральная посуда, но блюда импортной культуры и одноразовая культуральная посуда являются пластическими материалами.
в. В зависимости от размера, блюдо для культивирования клеток можно разделить на тарелки диаметром 35 мм, 60 мм, 90 мм и 150 мм.
d. В зависимости от способа разделения, чашку Петри для культивирования клеток можно разделить на двухсекционную, трехсекционную и т.д.
e. Чашки для клеточных культур делятся на две категории по материалу, пластику и стеклу. чашки для культур со стеклянным дном может использоваться для растительного материала, микробной культуры и культуры аппланации клеток животных и т. д. Пластиковые чашки для культивирования клеток изготавливаются в основном из полиэтилена и делятся на одноразовые и многоразовые. Они подходят для лабораторных операций по инокуляции, разграничению и разделению бактерий, а также могут использоваться для культивирования растительного сырья.
Использование чашки для культивирования клеток
a. Чашка для культивирования клеток необходимо очищать и дезинфицировать перед использованием, потому что чистота или отсутствие чистоты чашек для клеточных культур оказывает большее влияние на работу, что может повлиять на pH культуральной среды, а если присутствуют определенные химические вещества, они могут ингибировать рост бактерий.
б. Недавно приобретенный чашки для клеточных культур следует сначала промыть горячей водой, затем поместить в раствор 1% или 2% массовой доли соляной кислоты на несколько часов для удаления свободного щелочного материала, а затем дважды промыть дистиллированной водой.
c. Если вы хотите культивировать бактерии, необходимо поместить чашку Петри под воздействие пара высокого давления (обычно 6.8 * 10⁵ Па) и стерилизовать в течение 30 минут при температуре 120 ℃, затем высушить при комнатной температуре или провести стерилизацию сухим теплом, то есть поместить чашку Петри в печь и поддерживать температуру около 120 ℃ в течение 2 часов, чтобы уничтожить бактериальные клетки.
d. Только стерилизованные чашки для клеточных культур можно использовать для посевной культуры.
Внимание
Когда блюдо для культивирования клеток производит больше водяного пара, водяной пар будет конденсироваться на крышке и образовывать капли воды. Если чашка Петри имеет квадратную форму, капли воды разбросают колонии, поэтому большая колония может быть разбросана на множество мелких колоний, что создаст большие проблемы для культивирования и подсчета бактерий. Поэтому, когда среда находится сверху, а крышка снизу, капли воды не будут капать на колонии.
Применение чашки для культивирования клеток
Технология обработки поверхности культуральными пластинами
А. Покрытие субстрата
а. Коллагеновая и гелевая обработка
Лечение культуральные чашки с денатурированным коллагеном улучшает рост различных клеток, например способность эпителиальных клеток прикрепляться. Денатурированный коллаген покрывают путем заливки раствора самоизвлекаемого коллагена или коммерчески доступных заменителей (например, Akamu, sigma, Thermo Fisher и т. д.) в культуральную чашку, затем просто отсасывают избыток раствора и дают остатку высохнуть.
Коллаген также можно использовать в качестве неденатурирующего геля, который поддерживает рост синапсов в спинномозговых ганглиях куриных эмбрионов, рост и морфологическую дифференцировку клеток молочной железы, стволовых клеток, клеток печени и других эпителиальных клеток, а также способствует экспрессии многих других тканеспецифических клеток. функции в изолированных клетках, обычно используемые в трехмерных (3D) методах культивирования клеток. Коллаген разводят средой в соотношении 1:10. Количество используемого коллагена можно проверить с помощью экспериментов с градиентом для определения оптимальной концентрации для различных клеток, а затем рН доводят до 7.4. Жидкий коллаген превращается в гель, поэтому разбавление и дозирование должны быть быстрыми. Предпочтительно после того, как в гель добавлена среда для выращивания, его оставляют стоять при 4°С в течение 4-24 часов, чтобы убедиться, что гель хочет установить равновесие со средой перед добавлением клеток. За это время также могут быть добавлены дополнительные белки, такие как фибронектин или ламинин.
б. Матричные гели
Коммерческие матрицы, такие как матричные гели Becton Dickinson, обычно содержат ламинин, фибронектин и протеогликан, причем ламинин является наиболее распространенным компонентом. К другим матричным продуктам относятся ламинин F, гаптоглобин, ацетилгепаринсульфат, EHS Natrix, ECL и Cell-tak. Химический состав некоторых из этих продуктов не определен полностью, но они очищены; другие представляют собой смеси субстратов, которые трудно охарактеризовать, и могут также содержать некоторые связывающие факторы роста. Эти матрицы могут использоваться, если адгезия клеток важна для выживания и если нет необходимости указывать состав этих адгезий, как в случае некоторых широко используемых линий опухолевых клеток в культуре. Однако при изучении механистических вопросов эти матрицы часто используются только в качестве промежуточного этапа на пути к использованию адгезий с полностью определенным составом. Поэтому использование образцов с хорошо определенным составом и высокой чистотой, таких как желатин и коллаген, в качестве субстратов для трехмерной (3D) клеточной культуры для изучения механизмов становится все более распространенным.
c. Внеклеточные субстраты
Если требуется неактивное поверхностное покрытие, можно рассмотреть соответствующие типы монослойных клеточных культур, чтобы обеспечить подходящую матрицу для некоторых конкретных типов клеток.
Б. Кормовой яйценосец
Субстратные покрытия помогают клеткам прикрепляться, расти и дифференцироваться. Некоторым трудно культивируемым клеткам, особенно тем, которые труднее культивировать при низкой плотности клеток, для их поддержания требуются живые клетки. Примерами являются культуры многофункциональных стволовых клеток (iPS) и NK-клеток. Это может быть частично связано с утечкой метаболитов из клеток фидерного слоя или секретируемых факторов роста, которые оказывают дополнительное влияние на культуральную среду, а также из-за клеточных продуктов, которые оптимизируют поверхность прикрепления клеток.
C. Неклейкие поверхности крепления
Иногда операторы не хотят прикреплять клетки при культивировании клеток, поскольку нетрансформированные клетки в этих прикрепленных матрицах с трудом образуют колонии. Например, при культивировании гемопоэтических стволовых клеток для дифференцировки колоний мы обычно инокулируем гемопоэтические стволовые клетки на агаровый гель и дополняем его соответствующими цитокинами.
Эта система выбора неклейкой поверхности крепления включает в себя два важных фактора.
а. Предотвращение прикрепления к дну блюдо для культивирования клеток, потому что, как только клетки прикрепляются к основанию, происходит распространение и зависимый от прилегания рост.
б. Изолирование клеток, чтобы дочерние клетки, образовавшиеся в результате деления, могли объединяться (даже если они не прилипают друг к другу) для образования колоний. В настоящее время наиболее часто используются агар, агароза или метилцеллюлоза. Первые два представляют собой гели, а последний — высоковязкий золь. Поскольку метилцеллюлоза является растворенным веществом, в котором клетки могут медленно опускаться, под нее часто помещают слой коллагена.
Чашка для культивирования клеток в микробиологии
чашки Петри широко используются в биологии для культивирования микроорганизмов, таких как бактерии, дрожжи и плесень. Он лучше всего подходит для организмов, которые процветают на твердых или полутвердых поверхностях.
В качестве питательной среды для клеточных культур обычно используют агаровую пластину с несколькими слоями агара или агарозного геля толщиной в несколько миллиметров, содержащую необходимые организму питательные вещества (такие как кровь, соль, углеводы, аминокислоты) и другие необходимые ингредиенты (такие как красители, индикаторы и лекарственные препараты). Агар и другие ингредиенты растворяют в теплой воде и выливают в лоток для охлаждения. После застывания среды проводят инокуляцию («посев») образцов организма.
Чашки для клеточных культур Затем их оставляют в покое на несколько часов или дней во время роста организма и могут быть помещены в... инкубаторОбычно их накрывают или ставят вверх дном, чтобы снизить риск заражения спорами, переносимыми по воздуху.
Культура вируса или фага требует, чтобы партия бактерий была сначала культивирована в чашке Петри, а затем чашка Петри становится средой для вирусного инокулята.
Хотя чашки Петри широко используются в микробиологических исследованиях, чашки Петри меньшего размера часто используются для крупномасштабных исследований, в которых культивирование клеток в чашках Петри может быть относительно дорогим и трудоемким.
Как выбрать чашку для культивирования клеток?
Если вы заинтересованы в нашем Блюдо для культивирования клеток или есть какие-либо вопросы, пожалуйста, напишите по электронной почте info@antiteck.com, мы ответим вам как можно скорее.