katalogi: Elisa to'plamini ishlab chiqarish uchun uskunalar
Optimallashtirishning muhim nuqtalaridan biri Elishay yuvish hisoblanadi ELISA mikroplastinkasi. Elishay plastinkasini yuvish bosqichi bog'lanmagan antikorlardan kelib chiqadigan fon signalini pasaytiradi va shu bilan tahlilning signal-shovqin nisbatini oshiradi. Darajalar orasidagi yuvish faqat aniq bog'lanish hodisalarini saqlab qolishni ta'minlaydi va oxirgi bosqichda signal hosil qiladi. Noto'g'ri yuvish nomuvofiqliklarga va yuqori fonga olib kelishi mumkin, natijada suboptimal natijalarga olib keladi.
Elishay tajribalarini o'tkazishda Elishay mikroplastinkalarini yuvishning ikki yo'li mavjud: ELISA plitalarini qo'lda yuvish va Elishay plitalarini yuvish uchun plastinka yuvish vositalari. Ikkalasi o'rtasida muhim farq yo'q, agar operatsiya talablarga muvofiq bo'lsa, ikkalasi ham to'g'ri va ishonchli natijalarga erishishi mumkin.
Qo'lda yuvish ELISA plitasi inson omili nisbatan katta, eksperimentator tajribaga ega bo'lishi kerak, yuvish soni etarli bo'lishi kerak, ta'sir juda katta emas, erkin ferment bilan teshik og'zini oldini olish uchun chegara sifatida faqat to'liq reaktsiya quduqlariga yuvish eritmasi miqdori qo'shiladi. yuvish uchun, teshik va teshik o'rtasida suyuqlik o'tishiga yo'l qo'ymaslik. Bundan tashqari, yuvishdan keyin quruqlikni ushlab turish juda muhim, aks holda noto'g'ri pozitivlarga olib kelishi oson. Har bir yuvishdan keyin plastinani changni yutish qog'ozga quriting va o'zaro infektsiyani oldini olish uchun plastinkani vertikal ravishda silang. Antigen-antikor kompleksining ajralishini oldini olish uchun kuch juda zo'ravon bo'lmasligi kerak; changni yutish qog'ozni bir marta ishlatish kerak va axlatni to'kish oson bo'lmagan changni yutish qog'ozni mos ravishda ishlatish kerak. Ferment konjugati quritishga chidamli emas, ayniqsa yuqori haroratlarda, u inaktiv bo'lish ehtimoli ko'proq, shuning uchun quritilgan reaktsiya plitasi havoda ta'sir qilish vaqtini iloji boricha qisqartirish uchun patlatilishi kerak, vaqt qancha uzoq bo'lsa, shuncha past bo'ladi. absorbsiya qiymati.
Immersion
1. Reaksiya eritmasini aspiratsiya qiling yoki silkitib quriting ELISA mikroplastinkasi.
2. Plitani yuvish eritmasi bilan bir marta yuving (quduqlarni yuvish eritmasi bilan to'ldirgandan so'ng, keyin silkitib oling).
3. Namlash, ya'ni quduqlarni yuvish eritmasi bilan to'ldiring, 1 ~ 2 daqiqaga joylashtiring, vaqti-vaqti bilan silkiting, ho'llash vaqtini o'zboshimchalik bilan qisqartirmaslik kerak.
4. Teshikdagi suyuqlikni so'rib quriting. Emish quruq puxta, mavjud nasos yoki bo'lishi kerak Vakuum pompasi so'rg'ich, shuningdek, suyuqlikni toza sochiq yoki changni yutish qog'ozda quritib silkitib olish mumkin.
5. 3 va 4 amallarni takrorlang, 3 dan 4 marta yuving (yoki ko'rsatmalarda ko'rsatilganidek). Bilvosita usulda, agar fon yuqoriroq bo'lsa, siz yuvish sonini ko'paytirishingiz yoki namlash vaqtini uzaytirishingiz mumkin.
Mikro titrlash plitasi asosan immersion yuvish usuli bilan qo'llaniladi. Yuvish eritmasi asosan ion bo'lmagan detarjenni o'z ichiga olgan neytral tampon hisoblanadi. Polistirol tashuvchisi va oqsil birikmasi hidrofobikdir va ion bo'lmagan yuvish vositasi ham hidrofobik, ham hidrofilik guruhlarni o'z ichiga oladi, ularning hidrofobik guruhlari hidrofobik birikmalar orqali oqsilning hidrofobik guruhlari bilan birlashadi, shuning uchun oqsil va qattiq fazali tashuvchining kombinatsiyasini zaiflashtiradi va hidrofilik guruhlar va suv molekulalarining birikmasi bilan oqsil suvli eritma holatiga qaytadi va shu tariqa qattiq fazali tashuvchidan ajralib chiqadi.
Yuvish eritmasidagi ion bo'lmagan detarjen odatda Tween 20 bo'lib, uning konsentratsiyasi 0.05% dan 0.2% gacha, 0.2% dan yuqori bo'lishi mumkin, antigen yoki antikorni qattiq fazada desorbsiyalashi va sezgirligini pasaytiradi. sinov.
Oqim suvni yuvish turi
Oqim suv bilan yuvish usuli dastlab kichik boncuk tashuvchilarni yuvish uchun ishlatiladi va yuvish eritmasi faqat distillangan suv yoki hatto musluk suvidir. Yuvayotganda maxsus moslama biriktiriladi, shunda mayda boncuklar oqayotgan suv ta'sirida doimiy ravishda o'raladi va yuviladi va 2 daqiqa davomida doimiy chayqalgandan so'ng, suyuqlik drenajlanadi va keyin 2 daqiqa davomida distillangan suvda namlanadi va drenajlanadi. . Namlash turi vannaga o'xshaydi, suv bilan yuvish turi dushga o'xshaydi, uning yuvish effekti yanada chuqurroq va oddiy, tezdir.
Tajribalar shuni ko'rsatdiki, chayish turi Elishay mikro titrlash plitalarini yuvish uchun ham qo'llanilishi mumkin. Yuvayotganda, suv oqimini oshirishga yoki suv bosimini oshirishga harakat qiling, suv plastinka teshigining yuzasiga ta'sir qilsin, yuvish effekti yaxshiroq.
Plastinka yuvish mashinasi yuviladi ELISA plitalari bir necha inson omillari, tez va doimiy sharoitlar bilan, lekin plitalarni yuvish uchun plastinka yuvish vositasidan foydalanganda quyidagi uchta asosiy nuqtaga e'tibor qaratish lozim.
Elishay mikroplastinkalarini yuvish uchun asosiy parametr yuvish hajmi hisoblanadi. Avtomatik plastinka yuvish mashinasi yuvish eritmasini tarqatadi. Agar siz ilgari yuqori fonni boshdan kechirgan bo'lsangiz, yuvish hajmini yuqori, afzalroq konvert hajmidan yuqoriroq qilib qo'yishdan tortinmang. Juda oz yuvish eritmasi tahlil qilingan sirtning bir qismini yuvilmagan holda qoldiradi, shuning uchun fonni sezilarli darajada oshiradi. Yuvish hajmi barcha reaksiya quduqlari uchun bir xil bo'lishi kerak.
Elishay mikroplastinkalarini yuvish samaradorligiga ta'sir qiluvchi asosiy parametr - bu yuvish davrlarining miqdori. Albatta, yuvish soni qanchalik ko'p bo'lsa, fon pastroq bo'ladi. Biroq, juda ko'p yuvish signal intensivligini kamaytirishi va tahlil qilishni qiyinlashtirishi mumkin. Har bir antikor yoki antigen inkubatsiyasidan keyin yuvishni uch marta takrorlash odatiy holdir. Biroq, umuman olganda, o'ralgan plitalar foydalanuvchi tomonidan o'ralgan plitalarga qaraganda kamroq yuvishni talab qiladi. Foydalanuvchi tomonidan qoplangan ELISA mikroplastinkalari uchun yuvish chastotasini optimallashtirish kerak.
Yuvish miqdori va sonini nazorat qilishning yana bir usuli - ortiqcha yuvish eritmasini qo'shish. Odatda, 96 quduqli plastinka har bir quduq uchun 330 dan 460 µl gacha bo‘ladi. shu bilan birga, ba'zi avtomatlashtirilgan plastinka yuvish vositalarini bu miqdordan ko'proq yuvish eritmasini, masalan, 1 ml ni tarqatish uchun dasturlash mumkin. buni qanday qiladi? Bu aslida juda oddiy: aspiratsiya funksiyasi tarqatish bilan bir vaqtda yoqiladi. Boshqacha qilib aytganda, dispenser ko'proq suyuqlik chiqarsa, aspirator ham suyuqlikni so'rib oladi. Ushbu texnika yuvish miqdorini oshiradi, lekin boshqa quduqlarga to'kilmasdan.
Elishay plastinkasining yuvish bosqichining samaradorligiga ta'sir qiluvchi bir qator parametrlar ham mavjud. Ushbu parametrlar aspiratsiya balandligi va aspiratsiya holatini o'z ichiga oladi, ularning ikkalasi ham fon (qoldiq hajm) va o'zgarishlarni kamaytirish uchun sozlanishi mumkin.
Qoldiq suyuqliklar fon signalini kuchaytiradigan bog'lanmagan antijenler yoki antikorlarni o'z ichiga oladi. Qoldiq hajmi qanchalik kichik bo'lsa, shuncha kam bo'ladi qoldiq suyuqlik bor va kamroq aralashadigan suyuqlik keyingi bosqichga o'tkaziladi.
Aspiratning balandligi qoldiq hajmiga sezilarli ta'sir ko'rsatishi mumkin; agar yuvish uchi va reaksiya qudug'i tubi orasidagi masofa biroz kattaroq bo'lsa, unda qoldiq hajmi keskin ortadi. Aksincha, agar yuvish uchi reaksiya qudug'ining tubiga bosilsa, u ham aspiratsiya samaradorligini pasaytiradi va qoldiq miqdori ortadi.
ELISA plitalarini yuvish uchun joriy mashinalar odatda ikki turdagi yuvish boshlarini ishlatadi: qattiq va suzuvchi. Suzuvchi yuvish boshidagi assimilyatsiya boshi yuvish jarayonida yuqoriga va pastga erkin harakatlanishi mumkin, qattiq yuvish boshi esa to'g'ri holatda o'rnatiladi. Qattiq yuvish boshlari bilan yuvish operatsiyalari optimallashtirish uchun murakkabroq, chunki siz assimilyatsiya balandligini juda ehtiyotkorlik bilan sozlashingiz kerak. Agar laboratoriyangiz bir nechta turli plitalardan foydalansa, bu juda ko'p vaqt talab qilishi mumkin. Suzuvchi yuvish boshini ishlatganda, pipetka uchi reaksiyaning tubiga tushadi. Balandlikni sozlash juda muhim bo'lmaydi, shuning uchun yuvish boshi pastga tushadi.
Shlangi joylashuvi ham qoldiq hajmiga muhim ta'sir ko'rsatadi; agar quduqda faqat bitta assimilyatsiya nuqtasi ishlatilsa (bu tez bo'lgani uchun tez-tez uchraydi), u holda assimilyatsiya joyini optimallashtirish kerak. Optimal joy yuvish boshining xususiyatiga bog'liq, lekin bu barcha yuvishlar uchun eng keng tarqalgan standart joy bo'lsa-da, u deyarli reaktsiyaning o'rtasida emas. Umuman olganda, optimal joy teshikning o'rtasi va teshik devori o'rtasida joylashgan.
Reaksiya quduqlarining shakli ham qoldiq miqdoriga ta'sir qiladi. C shaklidagi tagliklari bo'lgan mikroplastinkalar (dumaloq burchakli tekis tagliklar) odatda o'tkir burchakli tekis tagliklarga qaraganda kamroq qoldiq miqdoriga ega bo'ladi.
a. Suyuqlik in'ektsiyasining miqdori va qoldiq suyuqlik miqdori har kuni tuzatilishi kerak va yuvishdan keyin qolgan suyuqlik miqdori 2 mkl dan oshmasligi kerak.
b. Substrat qoplamasini shikastlamaslik uchun singan aspiratsiya ignasini o'z vaqtida almashtiring.
c. Chayish ignasi plastinkani tiqilib qolmasligi uchun turli xil ferment plitalari ishlab chiqaruvchilari uchun aspiratsiya boshining tushish balandligini sozlashga e'tibor bering.
d. Yuvish eritmasi miqdorini sozlashga e'tibor bering, juda ko'p yuvish eritmasi to'lib ketadi va juda oz miqdorda yuvish effektiga erisha olmaydi.
e. Kir yuvish eritmasining kristalli moddasi quvur liniyasini to'sib qo'ymasligi uchun mashinani o'chirishdan oldin quvur liniyasini yuvish uchun distillangan suvdan foydalaning.
f. Turli to'plamlarning yuvish eritmalarini aralashtirish qat'iyan man etiladi.
Qilish uchun ELISA plitasi yuvish effekti yaxshiroq bo'lsa, laboratoriya mashina va qo'lda yuvish usulining kombinatsiyasidan foydalanishi mumkin, mashinada yuvishdan keyin va keyin qo'lda yuvish plitasi 1 dan 2 martagacha, ideal yuvish effektiga erishish mumkin. Natijalar kafolatlanadi!
Kir yuvish eritmasining kristalli moddasi quvur liniyasini to'sib qo'ymasligi uchun mashinani o'chirishdan oldin quvur liniyasini yuvish uchun distillangan suvdan foydalaning.
Turli to'plamlarning yuvish eritmalarini aralashtirish qat'iyan man etiladi.
